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行業(yè)資訊

管式離心機(jī)在大腸桿菌破壁中的應(yīng)用案例

以下為管式離心機(jī)在大腸桿菌破壁后分離的4類典型應(yīng)用案例，覆蓋工業(yè)化生產(chǎn)、中試研發(fā)與實(shí)驗(yàn)室精分，含設(shè)備選型、關(guān)鍵參數(shù)與分離效果，可直接用于工藝對(duì)標(biāo)與設(shè)備選型。

一、重組干擾塑α包涵體分離

? 場(chǎng)景：高壓均質(zhì)破壁后，分離包涵體與可溶性雜蛋白/核酸碎片，用于干擾塑復(fù)性純化

? 設(shè)備：GF105N管式離心機(jī)，316L全密閉，轉(zhuǎn)速22000 r/min（離心力≈20000×g），處理量0.6–0.8 m3/h，帶夾套控溫（4–8℃）

? 工藝：發(fā)酵液收菌→高壓均質(zhì)（80 MPa，2次）→破壁液調(diào)pH 8.0→管式離心機(jī)（清液溢流，包涵體沉底）→包涵體重懸洗滌→二次離心

? 效果：包涵體回收率≥95%，雜蛋白去除率＞90%，碎片殘留＜0.1%，后續(xù)復(fù)性后干擾塑比活姓≥2.0×10? IU/mg，符合藥典要求

二、重組人胰島素前體精制

? 場(chǎng)景：酶解+超聲聯(lián)合破壁后，分離目標(biāo)蛋白沉淀物與細(xì)胞碎片/核酸，適配小批量高淳度制備

? 設(shè)備：小型臺(tái)式管式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速28000 r/min，適配20–50 mL樣本，冷阱控溫（0–4℃）

? 工藝：菌體重懸→溶菌酶（1 mg/mL）+EDTA→超聲破壁（30 kHz，20 min）→調(diào)鹽濃度→管式離心→上清液超濾濃縮→層析

? 效果：胰島素前體回收率≥92%，純度由85%提升至98%，核酸殘留＜10 ng/mg，內(nèi)毒塑＜0.2 EU/mL

三、動(dòng)物用重組生長(zhǎng)擊素生產(chǎn)

? 場(chǎng)景：大腸桿菌高密度發(fā)酵，破壁后分離菌體碎片與可溶性蛋白，規(guī)?；苽浍F藥原料

? 設(shè)備：GQ112N管式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速18000 r/min（離心力≈15000×g），處理量1.0–1.2 m3/h，連續(xù)進(jìn)料/出料

? 工藝：發(fā)酵液管式離心收菌→高壓均質(zhì)（100 MPa，3次）→破壁液稀釋→管式離心澄清→上清液鹽析→離心收集目標(biāo)蛋白

? 效果：蛋白提取率≥90%，澄清液透光率＞98%，碎片去除率＞99%，批次產(chǎn)能達(dá)50 kg/批，成本降低約15%

四、實(shí)驗(yàn)室級(jí)ji因組DNA提取

? 場(chǎng)景：小批量大腸桿菌（1–5 L）破壁后，分離ji因組DNA與細(xì)胞碎片/蛋白雜質(zhì)，用于ji因測(cè)序與質(zhì)粒構(gòu)建

? 設(shè)備：小型管式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速35000 r/min，離心力≈40000×g，適配10–20 mL離心管

? 工藝：菌液離心收集→酶解破壁→SDS輔助裂解→酚/綠仿抽提→管式高速離心→上清液醇沉DNA

? 效果：DN****段完整性好（無(wú)明顯剪切），純度A260/A280≈1.8–1.9，回收率≥85%，滿足測(cè)序與克龍實(shí)驗(yàn)要求

核心匹配要點(diǎn)

? 適配性：管式離心機(jī)適合高粘度、細(xì)顆粒、低固含量的破壁液澄清，能有校分離0.1–10 μm的菌體碎片，料液殘留＜0.5%

? 參數(shù)關(guān)鍵：轉(zhuǎn)速18000–28000 r/min、溫度0–8℃、進(jìn)料濃度5%–15%（干重），可平衡回收率與產(chǎn)物活姓

? 邊界：?jiǎn)闻_(tái)處理量＜1.5 m3/h，大規(guī)模生產(chǎn)建議與碟式離心機(jī)組合使用，提升效率